Импрегнация элементов макроглии (астроцитов)
Лучшим методом является импрегнация астроцитов хлоридом золота по методу Кахаля. Фиксацию материала проводят в 12% растворе формалина или лучше в специальном бромистом фиксаторе, состоящем из 14 мл формалина (крепкий нейтральный), 2 г бромида аммония и 100 мл дистиллированной воды.
Фиксация длится 2—8 дней (не дольше). Затем необходима промывка в водопроводной воде и резка на замораживающем микротоме. Толщина срезов 20—30 мкм. Прямо с микротомного ножа срезы переносят снова в бромидный фиксатор и в течение 2 сут выдерживают в термостате при 37 °С. После этого быстро промывают в дистиллированной воде и переносят в импрегнирующую смесь следующего состава.
Раствор хлорида золота
1% 10 мл
Раствор дихлорида ртути кристаллической 5% 8 мл
Дистиллированная вода 50 мл
Смесь должна быть свежеприготовленной и находиться в посуде из темного стекла.
В этой импрегнирующей смеси срезы выдерживают 2-8 ч. Срезы должны лежать свободно, в расправленном состоянии.
СПИННОЙ МОЗГ. SPINAL CORD. ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ СТРОЕНИЕ. НОРМА
Для этого необходимо в 25 мл смеси класть не больше 5-8 срезов. В процессе импрегнации срезы становятся коричневыми с красноватым оттенком. Если импрегнация будет слабая, можно держать срезы в этом растворе сутки и больше.
Для фиксации металлического золота в структурах срезов последние помещают в 10% раствор тиосульфата натрия на 15—20 мин, где срезы становятся бледнее и принимают фиолетовую окраску. Затем их промывают в 40—50% спирте, быстро проводят через абсолютный спирт, ксилол и заключают в бальзам. Метод, как правило, надежен. Неудачи могут зависеть от плохой фиксации или загрязненности реактивов. Оптимальная температура для импрегнации 20°С.
Результат. Астроциты с отростками краснофиолетового, серо-фиолетового или коричневого цвета.
Импрегнация элементов микроглии по В. К. Белецкому
Дает возможность импрегнировать также гистиоциты не только мозга, но и печени, подкожной клетчатки, адвентициальные клетки капилляров и т. д.
Метод основан на импрегнирующей способности аммиаката серебра. Необходимо соблюдать все условия, о которых говорилось выше при описании метода Бильшовского—Грос в модификации Б. И. Лаврентьева (чистота реактивов и посуды).
Фиксация материала: 10% раствор формалина, лучше нейтрального (до 5 дней). Материал, фиксированный недлительно, импрегнируется лучше, чем старый.
После фиксации материал необходимо хорошо обмыть в проточной водопроводной воде (24 ч), а затем в дистиллированной (30 мин). Далее материал можно: 1) не заключая, резать на замораживающем микротоме; 2) заключить в желатин; 3) заключить в целлоидин.
Необходимо отметить, что наилучшие результаты дает метод с заключением в желатин (карболовый или простой), но при известном навыке получают хорошие препараты и без заключения. Срезы делают на замораживающем микротоме (толщина срезов 10—20 мкм) и проводят через дистиллированную воду.
Для импрегнации необходимо иметь свежеприготовленный 10% раствор нитрат-аммиаката серебра и 10% раствор нейтрального формалина.
КОРА БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА. Cerebral cortex. Гистологическое строение
Работу проводят в четырех широких бюксах. В первый наливают 10% раствор аммиаката серебра, во второй — дистиллированную воду, в третий — 10% раствор нейтрального формалина, в четвертый — дистиллированную воду. Срезы переносят из дистиллированной воды в первый бюкс с аммиакатом серебра на 20—30 с, затем в дистиллированную воду (второй бюкс) на 1 с и после этого — в третий бюкс (с формалином). Все эти манипуляции делают быстро, чтобы срез не лежал в воде более 2 с. Серебро в формалине должно медленно восстанавливаться: срез сначала темнеет, затем становится серо-желтым или коричнево-желтым. Затем срезы помещают в четвертый бюкс с дистиллированной водой, откуда их вылавливают на предметное стекло и рассматривают при слабом увеличении микроскопа.
При слабой импрегнации следует дольше (часами) выдерживать срезы в формалине в последнем бюксе. Если гистиоциты совсем не выявились, надо отметить, какие структуры видны на срезе. Можно употреблять горячий формалин: он быстро восстанавливает серебро. Если срезы белые (белые пятна) или слегка желтые и если в них видны лишь отдельные ядра либо вообще структур не видно, значит, материал «кислый». В этом случае срезы перед импрегнацией нужно положить на 20— 30 мин (можно до 1 сут в зависимости от степени кислотности) в аммиачную воду (3—4 мл аммиака на 50 мл воды) и после промывки проводить импрегнацию.
На срезе могут осаждаться гранулы (зерна) или хлопья серебра и выявляться много ядер, это означает, что условия импрегнации слишком «кислые» для данного материала. Этого можно избежать: а) увеличением времени импрегнации в нитрате серебра; б) ощелачиванием раствора нитрата серебра. Зная, что при полном растворении всего осадка нитрата серебра аммиаком раствор получается слабощелочной, можно увеличивать щелочность раствора, приливая по каплям аммиак, или уменьшать щелочность, прибавляя по каплям 1% раствор нитрата серебра; в) подогреванием формалина и уменьшением его концентрации до 1—5%. Срезы по мере необходимости можно опускать в теплый или горячий формалин.
Если срезы в формалине быстро темнеют или даже чернеют, то материал «щелочной». Можно освободить материал от излишней щелочности, помещая срезы перед импрегнацией в 1—2% раствор уксусной кислоты на 15—20 с и более (до 1 сут) в зависимости от степени щелочности. После промывки производят импрегнацию.
Хорошее выявление в срезах волокнистых структур (коллагеновые, ретикулиновые, нервные волокна) означает, что для данного материала условия импрегнации слишком «щелочные». Этого можно избежать: а) уменьшением времени импрегнации; б) разведением раствора нитрата серебра; в) уменьшением щелочности раствора нитрата серебра (см. выше); г) заменой нейтрального формалина кислым; д) увеличением концентрации кислого формалина до 20%.
Источник: lmed.in
Способ импрегнации нервных тканей азотнокислым серебром
г:ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик Зависимое от авт. свидетельств 13 М. Кл аявлено 12,1 Ч,1968 ( 1232855/31-16) исоединением заявкиосударственныи комитетСовета Министров СССРпо делам изаоретенийи открытий Приоритет-018 8(088 етень По 351.1974 Опубликовано 28.Ч 11.1973. Бю Дата опубликования описания У вторзобретения В, В, Коротченкоститут физиологии имени А. А. Богомольца АН Украинской ССР аявител СПОС АНЕЙ ИМПРЕГНАЦИИ НЕРВНЫХ ЗОТНОКИСЛЫМ СЕРЕБРО ируютне мен Пример.10% -ном нейт5 — 7 суток.,После резктоме срезы тодистиллироваИмпрегниразотнокислогонии 30 сек дл1 — 1,5 мин длней более пл очки тканеи фьном формали ивающем микро.0 мк переносят в и па замор ажлщиной 15 -иную воду,ют срезы всеребра прия спинного ия вегетативньотных, чем сп раствореосве;цемозга и в и тка- оловной 20%-номобычном ГОЛОВНОГО х ганглне инной и моз ОИзобретение относится к области мелицины,Известен способ импрегнации нервныхтканей азотнокислым серебром, заключающийся в помещении срезов в 20%-ный раствор азотнокислого серебра, последующего помещения их в 20%-ный формалин, и затем ваммиачный раствор 20%-ного азотнокислогосеребра,Цель изобретения — разработка способа,обеспечивающего более полную и избирательную импрегнацию нервных элементов.Поставленная цель достигается обработкойспезов растворами повторяющимися циклами с малыми экспозициями, например от30 сек до 1,5 мин,краска восстанавливается раствор о 20%-ного формалина, куда срезы помещают не более чем на 10 сек.Срезы опускают в аммиачный раствор 20% -ного азотнокислого серебра, приготовленного следующим образом: к 5 — 10 смз 20%-ного раствора азотнокислого серебра прибавляют при непрерывном встряхивании по каплям 25%-ный раствор аммиака до тех пор, пока исчезнет коричневый осадок, Для проведения реакции наливают в часовое стеклышко 4 — 5 сме раствора н на каждый 1 с.ч прибавляют по 1 капле аммиака.
Затем наблюдают под микроскопом. Срезы приобретают слегка желтоватый цвет. В этом растворе срез находится около 1 мин.Срез переносят на 1 сек в аммиачную воду (1 ч. аммиака, 2 ч. дистиллированной воды). После этого срез помещают в 1 — 3%-ный раствор формалина.
Концентрация раствора формалина определяется в зависимости от степени импрегнации: при слабой импрегнации до 3%, при интенсивной — снижается до 1 % (длительность пребывания среза з растворе около 1 мин).Затем срез снова переносят в аммиачный раствор 20%-ного азотнокислого серебра. Если через 1 — 2 мин не достигнута требуемая окраска всех нервных элементов, срез снова помешают на 1 сек в аммиачную воду, затем в 1 — 3%-ный раствоп формалина на398746 10 Предмет изобретения Составитель С. Щенева Техред 3. ТараненкоРедактор Д. Пинчук Корректор Е. Михеева Заказ 3511/8 Изд.
Жю 967 Тираж 755 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 475Типография, пр. Сапунова, 2 короткое время, Не превышаЮ 1 цее 1 мин, затем опять в 20%-ный раствор аммиачного серебра. Цикл а ммиачный раствор 20% -ногоазотнокислого серебра — аммиачная вода1 — 3%-ный раствор формалина — аммиачный 5раствор 20% -ного азотнокислого серебра по-вторяется 2 — 5 раз, регулируя нужную степень импрегнации. При этом учитывают, чтоаммиачная вода тормозит импрегнацию, аформ алин ее стимулирует.Достигнув требуемую картину импрегнациито ли в аммиачном растворе 20%-ного азотнокислого серебра, то ли в 1 — 3%-ном фор.малине, импрегнацию прекращают помещекием срезов в аммиачную воду на 1 мин.Срезы промывают в дистиллированной ваде 1 — 3 мин.В большинстве случаев при этом апособеокраски отпадает необходимость помещениясрезов в 0,1 %-ный раствор хлорного золота,так как импрегнация соединительно-тканыхэлементов не происходит,Срез помещают в 5%-ный раствор гипосулыфита на 5 мин.После 3 мин промывки в дистиллированной воде срез проводят по спиртам — 70 — 80 — 96%-ной концентрации, просветляют и заключают в,канадский бальзам,Через 10 — 15 мин хорошо импрегнированный срез готов,Способ импрегнации нервных тканей авогнокислым серебром, путем помещения срезов в раствор азотнокислого серебра, последующего помещения их в раствор формалина и затем в аммиачный раствор азотнокислого серебра, отличающийся тем, что, с целью обеспечения избирательной импрегнации нервных элементов, обработку срезов растворами производят повторяющимися циклами с экспозициями от 30 сек до 1,5 мин.
Заявка
В. В. Коротченко Институт физиологии имениА. А. Богомольца Украинской ССР
МПК / Метки
Код ссылки
Похожие патенты
Способ очистки растворов азотнокислого серебра от микропримесей легко гидролизующихся тяжелых металлов
Номер патента: 664665
. путем про 15 пускания последних через слой окисленногоугля при рН 1,5 — 4,0.Отличительным признаком способа является пропускание растворов азотнокислогосеребра через слой окисленного угля при20 рН 1,5 — 40,Технология способа состоит в следующем,1 — 3,5 М растворы азотнокислого серебра, чда, имеющие рН от 1,5 до 4,0 про 25 пускают через кварцевую колонку, заполненную окисленным углем, со скоростью50 мл/ч. Без регенерации на колонке очищают 500-кратное по отношению к объемусорбента количество раствора. Затем провоз 0 дят регенерацию сорбента 20 — 30 объема664665 Таблица 1 Сг 2 п В 1 БЬ Серебро АдЛ 1 О,(исходное)(5 102.10 — а Составитель Р. Пензии Техред Н. Строганова Редактор Т, Пилипенко Корректор В. Петрова Заказ 1135/5 Изд. ЛЪ 369.
Раствор для удаления покрытий на основе золота и серебра
Номер патента: 1382874
. нержавеющей стали, меди и ее сплавов, покрытьпс никелем или кобальгом оП р и и е р 1. Малогабаритные детали из латуни (электрические контак. ты) с подслоем никеля и покрытыетолщиной 3-4 мкм покрытием в количествег50 дм загружают в винилпластовый перФорироваяный колокол объемом 7 л гри вращении 15-30 об/мин удаление300; 450;600150; 200;250О,З; 0,4;0,5 Элементарный иод Антрахинон 40 Процесс ведут при 20 С, Толщина покрытия 6-9 мкм. Время удаления пок45 рытия 2-3 мин. Детали с которых удаляют покры-.тия данными растворами, промывают и проверяют визуально на полноту,уда».50 ления покрытий. При этом даже в глухих отверстиях диаметром 1 г».г отсут» ствуют следы золота и серебра, а поверхность основы илн подслоя остает» ся без иэггенения.
Способ выявления дегенерированных нервных волокон и их окончаний
Номер патента: 321714
. азотцокислым серебром. Однако указанный способ це обеспечивает достаточно полной импрегцации окончаний дегецерироваццых нервцых волокон. щццои 2 о — 40 лн дважды промыва 1 от дистиллировдццой водой (по 5 агин и помещают в кислый раствор метавацадата аммония или пятиокиси ванадия па 15 — 40 яин. Затем срезы вновь дважды промывают по 5 лгин дистиллированной водой, помещают цд 20 — 30 яин в 3%-цый раствор дзотцокислого серебра и ополаскивают дистиллированной водой. Далее срезы помещают 10 цд 1 — 1,5 ин в дммиачцое серебро, послечего их переносят в редуцирующий раствор Наута и выдерживают в цем 2 — 3 мин, После промывки в течение 2,яин в дистиллировашюй воде срезы помещают ца 1 — 2 мин 15 в 0,5% -цый раствор гцпосульфита натрия,вновь.
2-гемдитиоалкил-1, 3диоксаны в качестве экстрагентов серебра из водного раствора
Номер патента: 721437
. реакции нейтрализуют 10%-ным раствором МСОз, отделяют органический слой, сушат его и подвергают вакуумной перегонке. Полу -, чают 106,2 г 2-(с-гемдцтиоэтил)-1,3- -диоксана с т.кип. 190 С/2 д мм рт.ст.,оов 1,5072, О 1,0998 с выхо 4дом 86,2%.ормула изоб где Йв качестварго растИ из вод 2-( Ф -Гемдитиоалкилбшей формулы3-диоксаны принятые1. Лвт «ю 52533 непублику 77/21 Тираж 495 Подписно нал ППП «Патент», г. Ужгород, ул.
Проектная ф иефНайдено, %: С 4 д 0 Н 7,9; 0,142;5 289 фСчНе ОВычнслено, %; С 48,6;, Н 8,1;О 14,4; 5 28,9.Э ИК-спектре присутствуют пятьинтенсивных полос в области 10201280 см (-0-С-О-) и малоинтенсивные попосы поглощения в области 750 см( — 3 -С -).П р и м е р 2, Аналогично примеру 1 используют метантиол. Температура 55.
Способ извлечения серебра из отработанных растворов и электролитов
Номер патента: 1786159
. первой стадии — по резкому увеличению интенсивности побочного выделения водорода (бурное газовыделение).4. На второй стадии, не прерывая тока электролиза, вводят в раствор небольшими порциями дисперсный порошок цинка из расчета 8 — 12 г/л и при перемешивании воздухом или механическом воздействии продолжают процесс до полного растворения цинка, что определяют по прекращению газовыделения в объеме раствора,На этой стадии серебро выделяется электролитически на катоде и в объеме раствора за счет реакции контактной с цинком. Остаточное количество серебра после завешения второй стадии составляет 0,01.0,1 г/л.5, На третьей стадии повышают плотность тока до 2 — 3,5 А/дм и продолжают2процесс электролиза еще 10 — 15 мин, После этого.
Источник: patents.su
Препарат №2: Пластинчатый комплекс (Гольджи) в нервных клетках. Импрегнация азотнокислым серебром.
П од малым увеличением найдите крупные, округлые клетки с желтоватой или серо-зеленой цитоплазмой, округлым белым ядром. Среди них найдите клетку, в цитоплазме которой четко видны диффузно расположенные темные, зернистые или нитевидные образования комплекса Гольджи. Расположите ее в центре поля зрения. Под большим увеличением рассмотрите, зарисуйте и обозначьте: цитолемму (1), цитоплазму (2), структуры комплекса Гольджи (3), расположенные диффузно, ядро (4).
Препарат №3: Симпласт (поперечнополосатое мышечное волокно). Окр. гематоксилином и эозином.
П од малым увеличением рассмотрите мышечные волокна, разрезанные вдоль и расположенные между ними светлые прослойками соединительной ткани. Установите выбранное мышечное волокно в центр поля зрения и под большим увеличением рассмотрите и зарисуйте сарколемму (1), саркоплазму (2) с поперечной исчерченностью (3), лежащие на периферии под сарколеммой ядра (4).
П репарат №4: Пигментные включения в нервных клетках substantia nigra среднего мозга человека. Окр. гематоксилином.
Под малым увеличением найдите скопления крупных темных клеток — нейроцитов. Под большим увеличением изучите структуру клетки, зарисуйте и обозначьте: крупное, округлое ядро (1) с хорошо различимым ядрышком (2) и коричневый пигмент (нейромеланин), имеющий вид компактных зернистых скоплений (3).
Препарат №5: Липидные включения в клетках печени.
Окр. кармин и осмиевая кислота.
П од малым увеличением рассмотрите крупные, полигональные клетки с многочисленными черными жировыми включениями в цитоплазме. Под большим увеличением изучите строение одной из клеток, зарисуйте и обозначьте: оксифильное ядро (1) с ядрышком (2), цитоплазму (3), липидные включения (4) в виде черных «капелек» различного диаметра, выявленных осмиевой кислотой.
Препарат №6: Митоз клеток печени.
Окр. железным гематоксилином.
Под малым увеличением рассмотрите общую структуру препарата и поставьте в центр поля зрения край препарата с мелкими темными клетками. Под большим увеличением рассмотрите особенности клеток краевой зоны.
профаза метафаза анафаза телофаза
Найдите и зарисуйте клетку, у которой хроматин (хромосомы) образует скопление в виде клубка — стадия профазы, клетку с хромосомами в виде «звезды» — стадия метафазы, клетку с концентрацией дочерних хромосом (хроматид) на полюсах — стадия анафазы. Сравните найденные митотические клетки с дифференцированными интеркинетическими клетками в других участках препарата, в ядрах которых, хорошо видно ядрышко и глыбки хроматина.
Демонстрационные препараты.
1. Включения гликогена в клетках печени.
2. Реснички эпителиальных клеток (срез трахеи).
3. Синцитии (костные клетки жаберной крышки).
4. Пластинчатый комплекс (Гольджи) в клетках надпочечника.
Источник: studfile.net