2.1. Вода является основным фактором в передаче возбудителя лептоспироза.
Лептоспир обнаруживают в воде биологической пробой на крольчатах, свинках, хомяках, ‘крапчатых сусликах, взрослых кроликах, используя одну из следующих методик.
2.2. Пробы воды объемом 1-2 л берут в стерильную посуду, подогревают до 30° и выливают в эмалированный кювет, — помещают в него на один час двух подопытных животных. кожа брюшка или задние ноги которых скарифицированы, так чтобы скарифицированная поверхность была погружена в воду.
Начиная с четвертого дня у крупных зверьков (крольчата, морские свинки) берут кровь из сердца с целью выделения гемокультур, исследуют микроскопически брюшной экссудат. Одного из мелких зверьков убивают. На 14-20-й день всех выживших животных также убивают. Патологический материал исследуют на наличие лептоспир. Кровь исследуют на РМА.
2.3. Пробу воды (до 500 мл) центрифугируют при 10-15 тыс. об/мин в течение 30 — минут, сливают надосадочную жидкость, а осадки из всех центрифужных стаканов суспензируют в стерильной — питательной среде для лептоспир или физиологическом растворе. Суспензию вводят внутрибрюшинно или подкожно хомякам по 0,5-1 мл, крольчатам и морским свинкам по 1-2 мл. В дальнейшем исследуют, как указано в п. 2.2.
Окраска гематоксилин-эозином
2.4. Полученный после центрифугирования осадок подкожно вводят в дозе 2-3 мл взрослым кроликам, не имеющим в крови лептоспирозных антител,
Через 7-14 и 20 дней кровь кролика исследуют по РМА с лептоспирами 13 серологических групп. Обнаружение специфических антител в титре 1: 10 и выше свидетельствует о наличии лептоспир в исследуемой пробе воды.
Импрегнация гистологических срезов из органов серебром по левадити
3.1. Материалом для гистологического исследования служат кусочки коркового слоя почек и печени толщиной не более 1 см, консервированные 10%-ным раствором формалина.
Лептоспиры удается обнаружить с наибольшим постоянством в гистологических срезах импрегнированных серебром по Левадити. Методы Крантца, Полагута и Майера менее эффективны.
3.2 Несколько кусочков органов не толще 1 см, лучше 2-‘3 мм, фиксируют в 10%-ном водном растворе нейтрального формалина 24-48 часов. После фиксации кусочки переносят в 96° спирт на 24 часа. Промывают в дистиллированной воде до тех пор, пока кусочки не осядут на дно бюкса (не менее 2-3 часов), воду меняют три раза.
3.3. Помещают кусочки в 1-3%-ный раствор азотнокислого серебра на 3-6 дней. Процесс серебрения ведут при температуре 37 °С. Раствор азотнокислого серебра готовят на свежей дистиллированной воде из расчета 15 мл раствора на один кусочек.
3.4. Прополаскивают в дистиллированной воде в течение 2-5 минут. После промывки кусочки переносят в небольшую порцию редуцирующей смеси в отдельной чашечке на 2 минуты (раствор быстро темнеет) и затем помещают их в приготовленный перед употреблением основной редуцирующий раствор следующего состава: пирогалловая кислота — 4 г, дистиллированная вода — 100 мл, формалин чистый — 5 мл.
Гистологические методы. Виды красителей. Окрашивание: гематоксилин-эозин.
Раствор готовят из расчета 20-25 мл на один кусочек ткани. Восстановление обязательно проводят в банке из темного стекла.
3.5. Кусочки выдерживают в редуцирующей смеси 24-48 часов при комнатной температуре в темном месте или в банке из темного стекла.
Время выдержки контролируют приготовлением единичных срезов через каждые 12-16 часов во избежание передержания, так как срезы могут стать черными. Промывают в дистиллированной воде 1-2 часа.
3.6. Обрабатывают препараты последовательно спиртами: в 96° спирт (спирт 1) на сутки; в 96° спирт (спирт 2) на сутки; в 96° спирт (спирт 3) — на сутки; спирт-метил (спирты этиловый и метилсалициловый поровну) — до опускания кусочков на дно бюкса, а затем в метилсалициловый — до утра.
3.7. После этого перекладывают в кашу-парафин (ксилол и парафин поровну) на 30 минут при 57°; парафин 1 — на 60 минут при 57 °С; парафин 2 — на 60 минут при 57 °С.
Из быстро остуженного парафина вырезают блок с кусочком органа и наклеивают на деревянный кубик. Приготавливают тонкие срезы на санном микротоме и наклеивают на предметное стекло, депарафинируют в трех бюксах с ксилолом по 10-15 минут в каждом и заключают под покровное стекло в канадский бальзам, подсушивают и просматривают под микроскопом со светлопольным конденсором при увеличении 90X7-10.
В случае неудовлетворительных результатов импрегнации лептоспир готовят препараты из других одновременно приготовленных блоков. Препараты необходимо хранить в темноте.
3.8. Микрокартина: лептоспиры черные, окружающая ткань буровато-желтая. Лептоспиры располагаются на поверхности эпителия и в просветах мочевых канальцев почек, несколько реже — в цитоплазме эпителия, преимущественно группами. После импрегнации серебром типичные лептоспиры имеют S-образную с 1-2 изгибами или змеевидную форму с грубыми, толстыми завитками, которые в отдельных случаях слабо заметны. Иногда в просвете и на поверхности эпителия мочевых канальцев встречаются аргирофильные гранулы (окрашены в цвет лептоспир), ‘которые при отсутствии типичных форм нельзя принимать за лептоспир.
Источник: studbooks.net
Препарат №2: Пластинчатый комплекс (Гольджи) в нервных клетках. Импрегнация азотнокислым серебром.
П од малым увеличением найдите крупные, округлые клетки с желтоватой или серо-зеленой цитоплазмой, округлым белым ядром. Среди них найдите клетку, в цитоплазме которой четко видны диффузно расположенные темные, зернистые или нитевидные образования комплекса Гольджи. Расположите ее в центре поля зрения. Под большим увеличением рассмотрите, зарисуйте и обозначьте: цитолемму (1), цитоплазму (2), структуры комплекса Гольджи (3), расположенные диффузно, ядро (4).
Препарат №3: Симпласт (поперечнополосатое мышечное волокно). Окр. гематоксилином и эозином.
П од малым увеличением рассмотрите мышечные волокна, разрезанные вдоль и расположенные между ними светлые прослойками соединительной ткани. Установите выбранное мышечное волокно в центр поля зрения и под большим увеличением рассмотрите и зарисуйте сарколемму (1), саркоплазму (2) с поперечной исчерченностью (3), лежащие на периферии под сарколеммой ядра (4).
П репарат №4: Пигментные включения в нервных клетках substantia nigra среднего мозга человека. Окр. гематоксилином.
Под малым увеличением найдите скопления крупных темных клеток — нейроцитов. Под большим увеличением изучите структуру клетки, зарисуйте и обозначьте: крупное, округлое ядро (1) с хорошо различимым ядрышком (2) и коричневый пигмент (нейромеланин), имеющий вид компактных зернистых скоплений (3).
Препарат №5: Липидные включения в клетках печени.
Окр. кармин и осмиевая кислота.
П од малым увеличением рассмотрите крупные, полигональные клетки с многочисленными черными жировыми включениями в цитоплазме. Под большим увеличением изучите строение одной из клеток, зарисуйте и обозначьте: оксифильное ядро (1) с ядрышком (2), цитоплазму (3), липидные включения (4) в виде черных «капелек» различного диаметра, выявленных осмиевой кислотой.
Препарат №6: Митоз клеток печени.
Окр. железным гематоксилином.
Под малым увеличением рассмотрите общую структуру препарата и поставьте в центр поля зрения край препарата с мелкими темными клетками. Под большим увеличением рассмотрите особенности клеток краевой зоны.
профаза метафаза анафаза телофаза
Найдите и зарисуйте клетку, у которой хроматин (хромосомы) образует скопление в виде клубка — стадия профазы, клетку с хромосомами в виде «звезды» — стадия метафазы, клетку с концентрацией дочерних хромосом (хроматид) на полюсах — стадия анафазы. Сравните найденные митотические клетки с дифференцированными интеркинетическими клетками в других участках препарата, в ядрах которых, хорошо видно ядрышко и глыбки хроматина.
Демонстрационные препараты.
1. Включения гликогена в клетках печени.
2. Реснички эпителиальных клеток (срез трахеи).
3. Синцитии (костные клетки жаберной крышки).
4. Пластинчатый комплекс (Гольджи) в клетках надпочечника.
Источник: studfile.net
Окраска импрегнация азотнокислым серебром какой цвет
(1) Найдите мягкую мозговую оболочку, покрывающую спинной мозг. Обратите внимание на взаимное расположение серого и белого вещества.
(2) Определите в задних рогах серого вещества тела мультиполярных вставочных нейронов, в передних рогах – тела мультиполярных двигательных нейронов.
(3) Обратите внимание, что центральный канал выстлан одним слоем кубических или призматических клеток эпендимы.
Спинной мозг, окраска гематоксилин – эозин (№ 53)
(1) Найдите мягкую мозговую оболочку, покрывающую спинной мозг. Обратите внимание на базофильно окрашенную хроматофильную субстанцию в цитоплазме тел нейронов передних рогов.
Кора мозжечка, окраска гематоксилин – эозин (№ 54)
(1) Найдите мягкую мозговую оболочку, покрывающую поверхность коры мозжечка. Обратите внимание на то, что кора мозжечка образует складки – извилины и борозды.
(2) Обратите внимание на взаимное расположение серого и белого вещества. При малом увеличении определите молекулярный, ганглионарный и зернистый слои серого вещества.
Кора мозжечка, импрегнация азотнокислым серебром (№ 124)
(1) При малом увеличении обратите внимание на взаимное расположение серого и белого вещества. Определите молекулярный, ганглионарный и зернистый слои серого вещества. Обратите внимание на лежащие в ряд крупные овальной формы тела грушевидных нейронов, образующих ганглионарный слой, и их дендриты, ветвящиеся в молекулярном слое.
(2) Обратите внимание на сеть отростков нейронов и глиальных клеток между нейронами – нейропиль.
Кора полушарий большого мозга, импрегнация азотнокислым серебром (№ 125)
(1) При малом увеличении обратите внимание на взаимное расположение серого и белого вещества. В глубине среза найти крупные отростчатые клетки треугольной формы – большие пирамидные нейроны, образующие ганглионарный слой. Определите также молекулярный, наружный зернистый, пирамидный, внутренний зернистый слои, лежащие выше ганглионарного и слой полиморфных клеток под ганглионарным слоем.
(2) Обратите внимание на сеть отростков нейронов и глиальных клеток между нейронами – нейропиль.
Задание III. САМОКОНТРОЛЬ
Изучив тему, вы должны отвечать на контрольные вопросы («Указания к лабораторным занятиям…», с. 31) и тестовые вопросы по теме («Сборник тестовых вопросов …»).
Рассмотрите и зарисуйте схему межнейронных связей в коре мозжечка.
Рассмотрите и зарисуйте схему цитоархитектоники коры полушарий большого мозга.
Таблица 12.1. Сравнительная характеристика спинномозговых и вегетативных нервных узлов
| Признаки | Спинномозговой узел | Вегетативный узел |
| Нейроны: 1. морфологический тип 2. функциональный тип | ||
| Локализация нейронов: 1. тела 2. дендриты 3. аксон | ||
| Типы глиоцитов |
Тема: ОРГАНЫ ЧУВСТВ
Задание I. ИЗУЧЕНИЕ ТЕОРЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
Приступая к изучению данного раздела, необходимо повторить тему (1) «Нервная ткань».
Общие понятия темы
Первичночувствующие (нейросенсорные) рецепторы и вторичночувствующие (сенсорно–эпителиальные) рецепторы, их эмбриональные источники развития, отличительные особенности строения.
Орган зрения
Глаз. Функциональные аппараты глаза. Источники развития, строение и тканевой состав фиброзной, сосудистой и сетчатой оболочек стенки глазного яблока. Роговица, ресничное тело, радужка, хрусталик, стекловидное тело: их строение, тканевой состав. Сетчатая оболочка как нервный центр экранного типа.
Орган равновесия
Рецепторные зоны. Цитофизиология клеток специализированных зон. Функция органа.
Орган слуха
Строение и функции наружного, среднего и внутреннего уха. Тканевой состав стенок улиткового канала. Типы клеток спирального (кортиева) органа, их функция.
Задание II. ИЗУЧЕНИЕ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
Изучив тему, вы должны распознавать (диагностировать) препараты и находить на них детали, отмеченные в «Указаниях к лабораторным занятиям…» (с. 31 — 34).
Роговица (№ 2)
(1) Сориентируйте препарат так, чтобы передний эпителий был вверху.
(2) Обратите внимание на значительную толщину собственного вещества, чётко выраженную заднюю пограничную пластинку и задний однослойный плоский эпителий.
Радужка (№ 56)
(1) На срезе глазного яблока найдите радужку, которая является частью сосудистой оболочки глаза. Определите её цилиарный и зрачковый края, расположите передним эпителием вверх. Обратите внимание, что передний эпителий радужки является продолжением заднего эпителия роговицы, а задний пигментный эпителий радужки является продолжением двуслойного кубического эпителия цилиарного тела.
(2) Обратите внимание на мышцу суживающую зрачок, лежащую в области свободного края радужки и мышцу, расширяющую зрачок, которая располагается вдоль пигментного эпителия.
Задняя стенка глаза (№ 151)
(1) При малом увеличении сориентируйте препарат так, чтобы склера была вверху. Отметьте, что склера является самой толстой оболочкой стенки глаза. Сосудистая оболочка расположена ниже. Обратите внимание на содержащиеся в ней скопления пигментных клеток, окрашенных в коричнево-черный цвет.
(2) Найдите сетчатую оболочку и при большом увеличении определите в ней 10 слоев. Обратите внимание, что наружная и внутренняя глиальные пограничные мембраны выявляются нечётко. Рядом с гистологическим рисунком сетчатой оболочки нарисуйте в таком же масштабе схему нейральных элементов сетчатки.
4. Улитковый лабиринт и спиральный (кортиев) орган (№ 57)
(1) При малом увеличении сориентируйте препарат так, чтобы улитковый канал, в котором находится кортиев орган, находился в центре. Сверху канал ограничивают вестибулярная мембрана и вестибулярная лестница. Кортиев орган расположен на базилярной пластинке, под которой располагается барабанная лестница.
(2) При малом увеличении определите спиральный ганглий в спиральной костной пластинке.
(3) При большом увеличении определите наружные и внутренние волосковые клетки, лежащие на фаланговых клетках. Рассмотрите внутренний тоннель, который располагается между клетками – столбами. Снаружи улитковый канал ограничен спиральной связкой, на которой находится сосудистая полоска. С внутренней стороны улитковый канал ограничен спиральным лимбом, он выстлан призматическим эпителием, который образует покровную мембрану, нависающую над кортиевым органом.
Задание III. ИЗУЧЕНИЕ ЭЛЕКТРОННЫХ МИКРОФОТОГРАФИЙ
Изучив тему, вы должны распознавать перечисленные электронные микрофотографии и находить на них детали, отмеченные в «Указаниях к лабораторным занятиям…» (с. 32 — 33).
Дата: 2019-03-05, просмотров: 248.
Источник: findout.su